23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

Controlul Justiției este unul din obiectivele cheie ale Rețelei Soroşisto-Progresiste. SUA. Soros se implică în cursele pentru alegerea procurorilor districtuali pentru a crea mai apoi o furtună judiciară împotriva conservatorilor

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

Filmul evenimentelor şi agresiunile protestatarilor la adresa jandarmilor de la mitingul din 10 august, prezentat de Jandarmerie

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

FCSB - HAJDUK SPLIT LIVE VIDEO ONLINE STREAMING PRO TV: meciul sezonului pentru Dică în Europa League

HAJDUK SPLIT - FCSB (STEAUA) LIVE VIDEO ONLINE STREAMING PRO TV: Meci greu în Europa League

Justin Bieber i-a înfuriat pe fanii lui Prince după un comentariu nepotrivit postat pe Instagram

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

HOROSCOP 17 august 2018. Situaţie tensionată în relaţie după multe zile libere. Previziuni pentru vineri

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Tupeu nemărginit al Ambasadorul SUA: "Parlamentul a adoptat Legea offshore încălcând toate principiile transparenţei şi negocierii" Cu cine să negocieze măi Klemă Progresistă? Cu voi care vreți să ne luați petrolul pe NIMIC? Păi vi l-a dat deja...

CRAIOVA - LEIPZIG LIVE VIDEO ONLINE STREAMING în Europa League. Meciul nu este televizat

TERAPIE DE ȘOC PENTRU POPULAȚIE CU GAZELE ROMÂNEȘTI. Guvernul Cioloș-Soros ne-a NENOROCIT. A liberalizat PREȚUL LA GAZE în avantajul companiilor străine înainte să plece. Preţul la gaze, mai mare cu 10% din aprilie. OMV RÂDE ȘI-ȘI FREACĂ MÂINILE

HALEP - TOMLJANOVIC LIVE VIDEO ONLINE STREAMING DIGI SPORT. La ce oră se va relua meciul oprit de ploaie

Panică la metrou: Călătorii de la Unirii au fost evacuaţi după ce s-a folosit un spray lacrimogen

Raed Arafat: Ne-am consultat cu fabricanții gazelor folosite n Piața Victoriei și am discutat cu un specialist din New York

Bancul zilei: Supărare părintească

MERKEL S-A OFTICAT după ce Donald Trump i-a spus că a generat un dezastru în Germania şi în Europa prin aducerea imigranților. Berlinul denunță referirile lui Donald Trump la Angela Merkel: "Candidatul republican trompetează lucruri lipsite de fundament"

Globaliştii au prăbușit Lira Turcească. Erdogan promite să sfideze "amenințările" SUA după prăbușirea monedei turceşti

Hoţii au intrat peste Rică Răducanu în casă şi i-au furat agoniseala de o viaţă. "Am rămas pinguin..."

Un ieşean a găsit formula matematică pentru a ilustra celebrul mesaj anti-PSD

#roMânia Sindromul Italia. Boala "importată" de românii plecați la muncă în străinătate: "Ieșeam pe după casă și îmi venea să urlu ca lupul!"

​WTA Cincinnati: Partida Simona Halep vs Ajla Tomljanovic, ntreruptă n setul decisiv din cauza ploii, se va relua joi

LIVE BLOG | Start la Cincinnati: Simona Halep vs Ajla Tomljanovic, după ora 3:00. Garbine Muguruza a fost eliminată din turul 2!

Cele mai bune filme erotice pe care le-ai ratat - Video

Italia: Ca să ştiți de ce trebuie votați întotdeauna conservatorii. Conservatorul Matteo Salvini susține familia naturală și reinclude mamă și tată în formularul pentru documentele de identitate

Stoican a răbufnit la conferința de presă: "Cine ești, mă, Dumnezeu? Eu nu sunt glugă de coceni! Du-te, bă, tată, acasă la tine". Pe cine vizează discursul furios al antrenorului

ncă un mecanic descoperit băut pe calea ferată după ce utilajul CFR pe care l conducea a deraiat

Laurențiu Cazan, coordonatorul jandarmilor la protestul diasporei, PRIMA declarație publică: Îmi cer scuze față de cei care au suferit. Îmi asum tot/ Prefectul Capitalei a fost în piață

Premieră agricolă: Îngrășăminte și erbicide din saci sau bidoane, înlocuite cu tablete efervescente

Mr. Laurenţiu Cazan, coordonatorul jandarmilor: De data aceasta manifestanţii paşnici nu s-au mai delimitat de cei violenţi

Un erbicid folosit de fermierii români de 40 de ani este cancerigen

​Financial review. ngrijorările marilor ziare străine de joi: Preoții pedofili, podul italian prăbușit, medicul anchetat pentru trata homosexualitatea prin metode homeopate, 10 familii acuză Europa de lipsa de acțiune climatică

Tenis: Meciul Simona Halep - Ajla Tomljanovic, întrerupt în setul decisiv la Cincinnati (WTA)

Sistemul bancar turcesc, salvat de Qatar cu 15 miliarde de dolari

Acest bărbat a văzut o "femeie" atractivă pe stradă și a luat-o în brațe, venind din spate. Când victima agresiunii s-a întors, perversul a avut parte de o mare SURPRIZĂ/ Atacatorul a fost ARESTAT

LIVE BLOG | Simona Halep, "încurcată rău" în turul 2 la Cincinnati. UPDATE | La ce oră se reia meciul! Garbine Muguruza, deținătoarea trofeului, a fost eliminată, iar Caroline Wozniacki a abandonat

CFR CLUJ – ALASHKERT LIVE VIDEO ONLINE STREAMING DIGI SPORT LOOK TV: Campioana României se gândește deja la play-off

Moment neobișnuit pentru Simona, la Cincinnati! FOTO | Halep, filmată de americani în timp ce-și schimba tricoul

Calendar ortodox 17 august 2018. Zi de mare sărbătoare. La mulţi ani sărbătoriţilor!

Vestea aşteptată de toţi şoferii din România. Ce se întâmplă cu ITP-ul

Utilaj CFR, deraiat în Dâmbovița: Două persoane sunt rănite/ Una dintre victime, preluată de un elicopter SMURD

Fonduri de cte 54.000 Euro pentru firme: S-a anunțat cnd se deschide programul Comerț 2018

Iași: Femeie la un pas de moarte după ce a vrut să nască la domiciliu cu ajutorul unei doule, a cărei identitate nu vrea să o dezvălui

Raed Arafat: Informarea potrivit căreia cei expuși la gazele lacrimogene nu sunt în pericol e o intenție de a liniști populația/ DSU nu ține partea Jandarmeriei, nu execută ordine politice

Petiţia "Jandarmeria e toxică. Cerem ajutorul ONU", semnată de peste 37.000 de oameni

Legea PENSIILOR. Cum se vor calcula pensiile românilor. Cine va primi mai mulţi bani

LIVE BLOG | Start la Cincinnati: Simona Halep vs Ajla Tomljanovic, după ora 2:30. Garbine Muguruza a fost eliminată din turul 2!

LIVE BLOG | Start la Cincinnati: Simona Halep vs Ajla Tomljanovic, după ora 3:20. Garbine Muguruza a fost eliminată din turul 2!

FCSB se pregătește pentru Hajduk, Becali anunță transferuri: "Vine, cu siguranță". Ultimele detalii despre Planic și jucătorul care l-a impresionat: "Se antrenează extraordinar, mi-a plăcut"

Cți bani europeni s-au atras n guvernarea Dăncilă: Dezastru la două programe mari

S-a stins din viaţă un cunoscut politician. A fost parlamentar timp de 18 ani

Tragedie în gimnastica mondială! Elena Shushunova, rivala Danielei Silivaș la Jocurile Olimpice de la Seul, a "murit brusc" la numai 49 de ani

Primera Division va fi televizată. Cine îl poate vedea din nou pe Messi în La Liga

Reacţia unor LESBIENE atunci când ating prima oară în viaţă un organ sexual masculin. Una şi-a sunat mama VIDEO

Statele Unite, ngrijorate de un misterios satelit rusesc, cu un comportament foarte anormal

Un romn care a plecat la muncă n Spania și-a luat apartament de 90.000 de euro n Iași. Ce lucrează n străinătate

SEX ŞI IUBIRE. "Soţul meu are o relaţie cu o colegă de birou, iar noi suntem prieteni de familie". Cum s-au dat de gol

Un senator PSD propune modificarea art. 192 din Codul Penal privind uciderea din culpă

Scrisoare către un pesedist/o pesedistă

Angajări pe salarii de 2.700 de lei net lunar. Iată postul vacant

MTI: Uzina BMW - Gergely Gulys: investiția dovedește că relațiile germano-ungare sunt solide și de perspectivă

Cutremur în România. Seismul s-a produs la o adâncime de 7 kilometri

Donald Trump i-a revocat accesul la date confidențiale fostului director CIA John Brennan

Meci oprit de ploaie. Scorul afișat de tabelă în înfruntarea Halep - Pavliucenkovași și când se reia disputa

Un om de afaceri şi-a înfiinţat o firmă numită "M...E PSD". Oferă prestări de servicii

UE, în pericol. Germania scufundă blocul comunitar

LIVE TEXT | U Craiova - RB Leipzig, de la 19:30. Echipa de start a lui Mangia: pe cine a trimis în atac, lângă Mitriță

VIDEO Un nou film al Jandarmeriei despre protestul din 10 august. n nregistrare nu apare nicio secvență cu intervenția brutală a forțelor de ordine asupra manifestanților pașnici / Bonus: video cu intervențiile din alte țări

Italia: 10-20 de persoane, ncă date dispărute după prăbușirea podului din Genova

Napoli și-a găsit portar. Reacția lui Tătărușanu! El e motivul din cauza căruia internaționalul a ratat transferul carierei

BAC 2018 Luni ncepe sesiunea de toamnă a bacalaureatului, cu examenul scris la Limba romnă

Gorghiu, către ministrul de Interne: Ţi-e limpede că vei răspunde la un moment dat pentru tot balamucul generat, nu-i aşa?

Cum a fost prinsă jandarmerița de huliganii din Piața Victoriei. Maiorul Cazan:Fata nu-și mai aduce aminte de ce a căzut, dacă a fost lovită sau s-a mpiedicat

Suporterii Oțelului Galați, gazați la Sarichioi, în Cupa României, când au scandat "M... PSD". Un fan a ajuns la spitalul din Tulcea, sufocat. Printre victime, vicepreședintele de la Oțelul. Jandarmii: "Nimeni n-a fost rănit"

Ai observat că nu mai merg att de bine postările pe Facebook? Ct și ce ar trebui să postezi pentru promovarea afacerii

Fosta gimnastă Elena Shushunova, rivala Danielei Silivaș la Jocurile Olimpice de la Seul, a murit

Doliu în lumea sportului. S-a stins din viaţă o campioană olimpică la gimnastică la doar 49 de ani

Mihai Tudose îndeamnă PSD să pună în discuție TEMELE ridicate de Andronescu și Bădălău

Cele mai puternice țări din lume. China urcă pe locul al doilea, Marea Britanie coboară o poziție, Romnia rămne pe locul 18 n Europa

Cum recunoașteți modelele străvechi de pe IE față de cele inventate recent. Cum recunoști o IE cu modele străvechi românești, de UN KITSCH.

Mr. Laurenţiu Cazan, coordonatorul jandarmilor: Procurorul militar care a asistat la acţiune a stat de la 17.00 până la 4.00

TAXA AUTO 2018. Află AICI totul despre noul timbru de mediu! Cât va costa pentru fiecare maşină în parte şi de când intră în vigoare

Șarpe de 1,20 metri, descoperit într-o mașină din Drobeta Turnu Severin. Ce a făcut șoferul

Klaus Iohannis și Parlamentul, ping-pong cu legile adoptate. Actele normative trimise de președinte la reexaminare/ Câte legi au fost contestate de șeful statului la CCR

Festivalul Girafelor, dedicat berii artizanale, adună ieșenii la Ciric și INTERZICE micii

Un şofer s-a oprit la câţiva metri de moarte, pe podul prăbuşit din Italia. "Am văzut maşinile din faţa mea cum se prăbuşesc" FOTO

Tenis: Cupa Davis - Federația britanică se opune proiectului de reformă

Managerii din comerț cred că vor crește prețurile cel mai mult la alimente, în următoare perioadă

Doar 3 la sută dintre oameni au aceste semne în palmă. Cum sunt interpretate?

Asasinarea lui Kim Jong Nam în Malaezia: Procesul va continua

Actriţa Maia Morgenstern şi fostul canoist Ivan Patzaichin, cetăţeni de onoare ai Capitalei

Lista ALDE la europarlamentare: Doi foști miniștri PNL, potențiali candidați - surse

Alertă la Metrou, după ce o petardă a fost aruncată în trenul staționat la Unirii 2/ Într-un alt tren au fost pulverizate gaze

Lista ALDE la europarlamentare: Doi foști miniștri PNL, potențiali candidați

Liderul Suprem al Iranului admite că a făcut o greșeală în negocierile privind Acordul Nuclear

Motivare:Procurorii CSM au dovedit exces de putere cnd au respins plngerea IJ privind raportul DNA

SUA condamnă sancțiunile impuse de către Turcia asupra importurilor de automobile, alcool și tutun

Zone din București și din județele Ilfov și Giurgiu rămân temporar, joi, fără curent electric

SUA și Mexic vor nființa o echipă comună luptă mpotriva cartelurilor de droguri

Restricţii de trafic în Capitală joi, vineri, sâmbătă şi duminică pentru organizarea unor evenimente

CITATUL ZILEI

SCENE DE SEX la "Mireasă pentru fiul meu"? Ce au văzut telespectatorii, la TV, a creat isterie | VIDEO

LIVE BLOG | FCSB - Hajduk Split, ora 21:30. Echipa de start aleasă de Dică + presiunea pusă de Becali. Flip, "blocat" de doi adversari. FOTO | Detalii cu privire la scenografia PRA + cum arată gazonul

Preşedintele opune veto reformei de scrutin ce interzice candidatura partidelor mici în alegerile din PE

Parchetul General: Procurorii militari au ridicat de la Jandarmerie documente privind substanţele chimice şi mostre de muniţie neletală

Protestatar, după ce a depus plângere la Parchetul Militar: M-au bătut bestial, jandarmii parcă erau demenţi

LIVE TEXT | U Craiova - RB Leipzig, de la 19:30. Echipele de start. Decizie de ultimă oră anunțată de olteni: meciul se vede!

Selymes sună adunarea. Discurs articulat, înaintea meciuluii cu FC Botoșani

PNL sesizează Avocatul Poporului n cazul OUG de nființare a Liceului Teologic Romano-Catolic de la Trgu Mureș

Reclama unui film de groază, a cărui acțiune se petrece în România, a fost eliminată de pe Youtube

Becali negociază plecarea lui Gnohere! Oferta foarte bună pe care o are pe masă pentru cel mai eficient jucător din lot

Alina Gorghiu, mesaj pentru Carmen Dan: Ți-e limpede că vei răspunde pentru echipa manevrată politic de la șefia Jandarmeriei?

Îl mai ştiţi pe bodyguardul lui Gigi Becali? Acuzaţii grave pentru luptătorul Cătălin Zmărăndescu


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17 Pag.18 Pag.19 Pag.20 Pag.21 Pag.22 Pag.23
Pag.24 Pag.25 Pag.26 Pag.27 Pag.28 Pag.29 Pag.30 Pag.31
Pag.32 Pag.33 Pag.34 Pag.35 Pag.36 Pag.37 Pag.38 Pag.39
Pag.40 Pag.41 Pag.42 Pag.43 Pag.44 Pag.45 Pag.46 Pag.47
Pag.48 Pag.49 Pag.50 Pag.51 Pag.52 Pag.53 Pag.54 Pag.55
Pag.56 Pag.57 Pag.58 Pag.59 Pag.60

Nr. de articole la aceasta sectiune: 7200, afisate in 60 pagini.



ieri 15:48 ȘTIRILE MEDIAFAX
ieri 02:41 CITATUL ZILEI