23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Active News - Cristian Dogaru - "Cu care Licurici ne va fi mai bine?" Trump-Netanyahu sau Federalista-UE? Autorul "nu vede niciun motiv de bucurie dacă schimbăm Stăpânul (Progresist)". Este o concluzie Fundamental Greșită pentru Soarta Țării Noastre

ILIESCU JUDECAT PENTRU SÂNGELE VĂRSAT. Dezvăluiri ȘOCANTE din Dosarul MINERIADEI. Iliescu a APROBAT distribuirea MUNIȚIEI DE RĂZBOI. Chițac a AVIZAT FOLOSIREA acesteia

În sfârșit Progresista Merkel, a zis-o pe ȘLEAU: Angela Merkel: Germania are un interes strategic în a avea relații bune cu Rusia. Gazoductul NorthStream 2 făcut exclusiv între Germania și Rusia merge înainte

Vaccinurile împing agenți patogeni să evolueze și să devină din ce în ce mai periculoși

QMagazine invocă Surse din Parchetul General care spun că Procurorul Mircea Negulescu este martor sub acoperire și a scris deja 50 de pagini devastatoare despre Laura Codruța Kovesi.

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

POSTUL LĂSAT DE LA DUMNEZEU, NE REGENEREAZĂ CELULELE ȘI NE VINDECĂ TUMORILE. Studiu Științific "Care este efectul Postului asupra regenerării celulelor stem din intestin. Descoperirea științifică făcută recent."

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

Suedia: Partidul Democrații Suedezi (antiimigrație), scor record înaintea alegerilor din septembrie (sondaj)

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

Dobânda de Referință a lui Isărescu, care a impus pe rând 3 recorduri mondiale în acest an, a UMFLAT pe spinarea românilor profiturile băncilor străine din România cu pâna la 120%

Dragnea îl acuză pe Iohannis: "A stat la masă cu un stat, Kosovo, care încă nu e recunoscut de România". Numai atât? Iohannis a relocat populații străine pe teritoriul României la cererea lui Merkel și a lui Juncker încălcând Constituția României

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Italia are un nou guvern. Partidul progresist neormaxist "Movimento 5 Stelle", a căzut de acord cu partidul conservator "Lega Nord" asupra persoanei primului ministru

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

Procurorii progresişti arătați cu degetul de judecători. Judecătoarea Florica Roman: „În loc să condamne abuzurile, Asociaţia Procurorilor doreşte să nu se mai vorbească despre ele”

Această plantă cu flori minunate te OTRĂVEŞTE. Nu o mai ţine în casă

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Ultimele postările ale lui Donald Trump în lupta sa cu Rețeaua Progresistă care controlează FBI-ul și Departamentul de Justiție din SUA - LIVE TEXT

Alegeri Republica Moldova pentru primăria Chișinăului: Progresistul Pro-UE-ist, Andrei Năstase și socialistul pro-rus Ion Ceban, în turul doi al alegerilor în Chișinău. Așa cum vedeți nici un Pro-Român

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

Analiza Gramaticala - Clasele V - VIII

Horoscop iunie 2018: Situaţia financiară a acestor nativi va scăpa de sub control. Îi aşteaptă zile grele

Tânără de 18 ani căutată de scafandrii. Fata s-a aruncat de pe podul de la Cernavodă

Noile vaccinuri vor altera în mod permanent ADN-ul uman. Nimeni nu va mai şti exact decât producătorii lor ce anume vor modifica vaccinurile în ADN-ul fiecărei persoane.

FOTO HTC a lansat noul telefon vrf de gamă: HTC U12+ / Patru camere foto, nici un buton fizic și o ramă de metal care simte atingeri și strngeri ale minii pentru a lansa diverse funcții

Cele mai bune filme erotice pe care le-ai ratat - Video

Concurs naţional Gazeta Matematică Junior 2017. Ce SUBIECTE au primit elevii la examen, în anii trecuţi

HOROSCOP ZILNIC 24 MAI 2018. Orice vi se pune în cale joi e o zi în care le depăsiţi pe toate

Elevii și preșcolarii din cinci sate de oieri din Munții Sebeșului au intrat de luni, 22 mai, în vacanța de vară. Ei îşi vor însoți părinții în transhumanță pentru „văratul” oilor la munte.

VIDEO Imaginile carnagiului cu nouă români morți în Ungaria, filmate de un șofer aflat în spatele camionului

I-a dat replica lui Ion Țiriac, după amenințările făcute de omul de afaceri român

O firmă înființată și, mai apoi, coordonată de Vasile Dâncu și-a adjudecat o licitație de la ANCOM fix pe 3.552.000 de lei, la mijlocul lunii mai. La mijlocul lunii martie Dâncu și Grindeanu, actualul sef al ANCOM, stăteau la un șpriț împreună.

Lovitură neașteptată! Martha și Bela Karoly trebuie să dea socoteală pentru abuzurile sexuale comise în casa lor

Accidentul din Ungaria. Cele 9 victime au lăsat n urmă 35 de copii orfani

EXATLON 22 MAI 2018 LIVE VIDEO KANAL D: Eliminare-surpriză, voturile telespectatorilor nu s-au luat în considerare UPDATE

Subiectele zilei: Distrugerea Pilonului II de pensii: Romania copiaza modelul Ungariei. Primii patru pasi au fost facuti; Romania exporta energie dupa cum bate vantul; Formarea guvernului italian - primejdie pentru UE?

MAE: Toate cele nouă persoane care au murit n accidentul de microbuz din Ungaria aveau cetățenie romnă

Cadou de 100.000 de euro pe care Simona Halep i l-a făcut lui Ion Țiriac

Politic show: Dacian Ciolos: Acest 'experiment judiciar' al PSD-ALDE trebuie sa inceteze; Guvernul va modifica legislatia privind evaziunea fiscala. Si, din nou, Codul fiscal; Pilonul II de pensii naste dihonie in coalitie

Enigmele druizilor, preoții-vrăjitori ai celților. Mărturii despre cele mai ciudate personaje ale lumii antice

FINALA EXATLON 2018: Ionuţ Sugacesvshi şi Vladimir Drăghia se bat pentru marele premiu. Castigator Exatlon se decide miercuri, 23 mai

Caru' cu vedete:Mesajul ascuns pe care Regina a tinut sa-l transmita lui Harry si miresei Meghan, prin hainele sale; Meghan Markle e prima mireasa care a purtat asa ceva la o nunta regala

Un bărbat de 30 de ani a fost dat în judecată de propriii părinți pentru că nu vrea să se mute din casă

CASTIGATOR EXATLON 2018: Carmen Harra a dezvăluit cine va lua marele premiu. Finala Exatlon are loc miercuri seară

Roboții pot dezvolta, n prezent, organe umane

Drama cumplită a românilor morţi în Ungaria. Cei nouă au lăsat în urmă familii cu zeci de copii

​VIDEO Șoferul microbuzului implicat n accidentul din Ungaria transmitea live pe Facebook n momentul producerii impactului

UPDATE. BAREMUL DE CORECTARE. EVALUAREA NAȚIONALĂ CLASA VIII. EXAMEN LA LIMBA ROMÂNĂ. Argumentați că Poezia "Ploaia" de Magda Isanos aparține genului liric. Cum arată poezia pe care au avut-o de analizat elevii la Evaluarea Națională la Română.

Ce i-a făcut o blondă din Suceava iubitului ei. Clipul a devenit VIRAL. VIDEO

Orașul din România unde piața imobiliară a ajuns aproape de nivelul dinaintea crizei economice din 2008

Un satelit european a detectat o pată de petrol ce ar putea proveni de la avionul EgyptAir prăbușit (ESA)

FOTO Ce trebuie să știm despre plantele medicinale care se culeg în luna mai

Măicuțele care au "adoptat" cinci frați orfani: "Suferim alături de ei, ne bucurăm împreună cu ei"

Chile: 14 preoți suspendați într-un nou scandal de abuzuri sexuale (episcop)

Rivalul lui Orban din PNL figurează că a votat legile Justiției alături de PSD. "A ieșit din muțenie când am declanșat cel mai dur atac împotriva PSD"

Bara, județul Timiș 300 de locuitori la 11.000 de oi

Wozniacki a surprins pe toată lumea în urma declarațiilor despre primul loc mondial: "Este deprimant!"

Radu Gyr a fost condamnat la MOARTE pentru o poezie. Unii vor să ne-ntoarcem din nou în acele vremi. Cum a fost condamnat la moarte Radu Gyr pentru poezia "Ridică-te, Gheorghe, ridică-te, Ioane!" - VIDEO

Analiză NY Times: Ce e-n neregulă cu Europa?/ ntotdeauna au existat forțe ntunecate n Europa

Decizia care poate grăbi retragerea Serenei Williams! Americanca a primit o lovitură neașteptată

Tragicul accident din Ungaria a fost transmis live pe Facebook. Ultimele secunde, filmate de una dintre victime VIDEO

VIDEO Brexitul a costat 900 de lire sterline fiecare gospodărie britanică

Agatha Christie: cum a fost influențat unul din romanele sale polițiste de scrisori vechi de 4000 de ani

Brânză cu eColi la Mega Image și NIMENI nu a închis magazinele și fabrica din Franța cum au făcut cu Lactate Brădet. ALERTĂ ALIMENTARĂ: Mega Image a retras de piață un sortiment de brânză, posibil infestată cu E. Coli

Utile: La ce sa fii atent cand cumperi shaorma ca sa nu te imbolnavest; Iti cade parul? Uite care pot fi cauzele; Alimente care contin magneziu. Consuma-le daca te simti obosit

Papa Francisc se va întâlni cu un al doilea grup de victime ale unui preot pedofil chilian

EXATLON ROMÂNIA 23 mai. Ştefan şi Alex, declaraţii emoţionante după ce au ieşit din concurs

MANIPULAREA PRIN SEX. OANA ŞI VIOREL LIS, sex tape-ul care face înconjurul internetului. IMAGINI XXX

Șmecheriile lui Isărescu care nu răspunde niciodată de nimic. Lia Olguța Vasilescu: "BNR stabilește ținta inflației. Acum fuge de responsabilitate"

CASTIGATOR EXATLON 2018: Cum a primit Ionuţ poreclă de "Jaguarul"

Orban: Plngerea contra lui Dăncilă și Dragnea am făcut-o din proprie inițiativă

Georgică Severin, audiat în Comisia de cultură a Camerei Deputaţilor. Jurnaliştii din SRR i-au cerut demisia

Ucraina a testat rachetele antitanc Javelin achiziționate recent din Statele Unite

CCR dezbate astăzi sesizarea președintelui Iohannis privind legea prin care Monitorul Oficial trece din nou în subordinea Camerei Deputaților

CCJ ar putea pronunța decizia definitivă n dosarul Gala Bute

Dezbatere pe tema evoluției demografice din România, organizată miercuri de INS

Cancerul de vezică urinară. Vezi care sunt simptomele ce ar trebui să ne trimită la medic

Italia: Misterul studiilor lui Conte la Universitatea din New York

Mike Pompeo se declară optimist în privința întâlnirii dintre Donald Trump și Kim Jong-un

Jaf ARMAT la o bancă din Baia Mare: Două persoane au furat 100.000 de lei

Jimmy Carter: Dacă rezolvă criza nord-coreeană, Trump ar putea primi premiul Nobel pentru pace

Peste 130 de persoane reținute la Paris, dintre care 101 arestate într-un liceu ocupat, după o zi de mobilizare a funcționarilor

Accident la stația de epurare din Brăila, soldat cu doi morți și trei răniți

Tragedia din Ungaria. 13 copii au rămas orfani

Elicopter prăbuşit la Turda. Pasagerii au scăpat GALERIE FOTO

Cum motivează Valer Dorneanu vizita controversată în Rusia. Președintele CCR aruncă vina pe Ministerul de Externe și îi bate obrazul lui Meleșcanu

"Memeluşa" va deveni mămică, Cătălin Botezatu este naş de botez. "M-am lăsat de fumat, iar la Bamboo promit că nu ajung vara asta"

VIDEO Un elicopter utilitar s-a prăbușit în apropiere de Turda. Doi oameni se aflau la bordul aeronavei

ŞOFERUL JUSTIŢIAR din Cluj. S-a apucat să vandalizeze maşinile parcate ilegal pe o stradă. Acum este căutat de poliţie FOTO

FOTO Meghan Markle, fermecătoare la prima apariție oficială în calitate de ducesă de Sussex. Prințul Harry, într-o situație ce a stârnit hohote de râs

BREAKING Elicopter prăbușit pe un deal din Turda. FOTO

Donald Trump a descalificat-o pe Angelina Jolie: "Este de nota 7". Cine e, pentru el, cea mai frumoasă femeie

Paul Stănescu, după ce Iohannis a cerut Guvernului să spună dacă mai are bani de salarii și pensii: Președintele e dezinformat

S-a sinucis luna trecută într-o cameră de hotel. Familia a anunţat funeralii private

Peste 1.400 de judecători și procurori au semnat "Rezoluția magistraților români pentru apărarea statului de drept"

Cine este șoferul care a provocat cumplitul accident din Ungaria. A lăsat în urmă doi copii orfani

Halep și Șarapova au sărit în apărarea Serenei Williams: "Mi-ar plăcea să fie schimbată regula asta"

COD RUTIER 2018: Amenzi usturătoare pentru şoferii care îşi atârnă iconiţe de oglinda retrovizoare

Un cântăreţ de la noi are cancer. Scrisoarea tulburatoare a soţiei solistului: "Este vorba de cancer colorectal cu metastaze"

Meghan Markle, prima apariție oficială ca ducesă de Sussex, la "garden party-ul" dedicat prințului Charles

Cadoul de 100.000 de euro pe care Simona Halep i l-a oferit lui Ion Țiriac!

EDU.RO: SUBIECTE ROMANA EVALUARE NATIONALA CLASA A VI-A 2018. Ce se întâmplă cu notele

Bărbatul din spatele nregistrării Laurel/Yanny a dezvăluit care este cuvantul pe care l spune

CCR dezbate astăzi sesizarea președintelui Iohannis privind legea prin care Monitorul Oficial trece din nou n subordinea Camerei Deputaților

Scriitorul Philip Roth, un gigant al literaturii americane, a murit la vârsta de 85 de ani

Meciuri de fotbal dramatice de la Mondiale. De la dezastrul de pe Maracana, la mâna lui Maradona

MAI, mesaj dur în urma tragicului accident din Ungaria. "STOP. E prea mult, demult este prea mult". Ce sunt îndemnaţi să facă pasagerii

Ceara de albine este foarte bună şi pentru frumuseţe. Descoperă cum s-o foloseşti

Închisoare cu suspendare pentru educatoarele de la "Grădinița Groazei". Ce daune trebuie să plătească femeile acuzate că băteau copiii

Lupte: Pîrcălabu (FRL) - Traversăm o perioadă destul de bună, cred că putem face o figură frumoasă la JO

Georgică Severin urmează să fie audiat în Comisia de cultură a Camerei Deputaților

Uniunea Europeană ia în calcul adoptarea unor noi măsuri împotriva Venezuelei

Dăncilă: Sunt bani de salarii și pensii; să nu creăm îngrijorări în rândul salariaților sau al pensionarilor

Cum recunoașteți modelele străvechi de pe IE față de cele inventate recent. Cum recunoști o IE cu modele străvechi românești, de UN KITSCH.

Avertisment de la Comisia Europeană: România a deviat semnificativ de la MTO

Premierul francez și-a anulat vizita în Israel (Le Figaro)


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17 Pag.18 Pag.19 Pag.20 Pag.21

Nr. de articole la aceasta sectiune: 2433, afisate in 21 pagini.



ieri 19:06 ȘTIRILE MEDIAFAX
ieri 15:56 SSD M.2